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细胞交叉污染?

作者:上海翼和应用生物技术有限公司 2022-01-10T16:50 (访问量:9495)

哺乳动物细胞系在疫苗生产、单克隆抗体制备、药物筛选和基因重组产品等生物医药领域有着广泛的应用。细胞系错用、交叉污染等问题,会造成巨大损失。翼和生物结合近7年细胞系遗传质量鉴定方面的服务经验,制定了一套特色检测方案,帮您及时发现细胞交叉污染问题。翼和方案两步排查,确保细胞系质量:首先,人源/小鼠细胞STR鉴定,排查是否存在种内细胞交叉污染;其次,若细胞基因组DNA质量正常,STR扩增却没有信号,可进行细胞种属检测,排查是否存在种间细胞交叉污染,可区分人、小鼠、大鼠和仓鼠等4个物种的交叉污染

细胞培养过程中交叉污染的概率


据ATCC估计,1977年错误使用细胞的概率是16%,1999年是18%。根据我们的经验,国内细胞系用错的概率不低于20%;即如果一个研究所有二十个课题组,按概率估计,有4个课题组用的细胞是错的。

2017年,武汉大学病毒学国家重点实验室发表了一篇文章,主题便是“278株常见人源肿瘤细胞系的交叉污染及错误鉴定(Investigation of Cross-Contamination and Misidentification of 278 Widely Used Tumor Cell Lines)”,该实验室采用STR分型方法进行细胞系遗传背景鉴定,结果得到了一个可怕的结果。

作者分别从国内28个研究机构搜集了278株常见人源肿瘤细胞系,其中国内建立的细胞系71株,国外建立的细胞系207株。经STR鉴定后发现,来自于22个研究机构的128株细胞存在交叉污染/错误鉴定的情况,错误率高达46%。其中国内建立的细胞系占52株,这表明了什么,国内建立的细胞系交叉污染/错误鉴定率竟然高达73.2%,并且67.3%(35/52)国内交叉污染/错误鉴定的细胞系结果被证实是Hela细胞或被Hela细胞部分污染的!

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种内细胞交叉污染检测

人源细胞系:翼和生物采用21个人源STR位点方案,包括国际金标准的8个STR和1个性别鉴定位点在内,具有更高分辨率,可与5个国际权威细胞数据库进行比对,出具专业的细胞系遗传质量鉴定中英文报告。

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人源细胞系21 STR位点ABI3730xl毛细管电泳峰图

STR基因分型比对数据库结果示例

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小鼠细胞系:翼和生物利用荧光PCR扩增小鼠基因组中9个STR基因座位,PCR产物在毛细管电泳分离之后可通过荧光检测进行基因分型。同时加入1个人源STR位点,同步排查人源细胞系交叉污染。根据所得的STR分型结果与细胞STR数据库(Expasy)比对,从而鉴定样本所数的小鼠细胞系。
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小鼠STR分型图谱及检测结果
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种间细胞交叉污染检测

上海翼和生物为客户提供基于qPCR技术的种系鉴定方案,选择人、小鼠、大鼠和仓鼠基因组中特异基因片段,设计引物和荧光探针,快速鉴定种系来源。该方案灵敏度和特异性高,可以检测样本中不同种系来源的细胞污染,当污染细胞占比> 5% 时,可被稳定检出。

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Panel1 人源小鼠体系:只有人源、小鼠样本会扩增,大鼠、仓鼠不扩增;蓝色为人源扩增曲线;绿色为小鼠扩增曲线

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Panel2 大鼠仓鼠体系:只有大鼠、仓鼠样本会扩增,人源、小鼠不扩增;蓝色为仓鼠扩增曲线,红色为大鼠扩增曲线

关于翼和

上海翼和应用生物技术有限公司是上海市遗传学会理事单位,至今已有十六年历史,专注于为国内科研工作者和生物医药企业提供各类分子遗传学技术服务和质控试剂盒。基于自主知识产权的多重PCR技术,翼和生物研发和改良了适用于荧光定量PCR、一代测序和二代高通量测序平台的多种检测技术和产品,逐步形成了在细胞组织和动物模型质控、大健康基因检测和科学研究3大板块产品布局。近年来,翼和生物在首席科学家肖君华教授带领下,研发推出了10多项创新技术和产品,并致力于建设符合国家和国际标准的检测实验室。这给企业注入了新的生命力,促进了翼和生物的高速发展。未来,翼和生物必将发展成为该领域国内一流的专业供应商。

17年专业服务经验,值得信赖!

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