氯仿是Trizol试剂提取提取RNA的必需品。由于氯仿为易制毒类化学品，在订购、使用和储存等方面有很多的法律法规要求和限制。2019年7月23日，氯仿被纳入生态环境部国家卫生健康委员会发布的《有毒有害水污染物名录(第一批)》；2023年3月1日，氯仿又被纳入《重点管控新污染物清单(2023年版)》。氯仿有很强的麻醉作用，主要作用于中枢神经系统，造成肝，肾损害，已被流行病学证实为动物致癌物质，危害很大。氯仿即属于有毒试剂，又属于管制试剂，采购受到限制。怎么办呢？

翌圣生物推出RNA Extraction buffer RNA提取辅助试剂19203ES，该试剂安全、低毒，主要用于在Trizol、TRIeasyTM（10606ES）等RNA抽提过程中完美替代氯仿，快来一起了解下吧！

Trizol法提取总RNA

  基本原理  

Trizol试剂可以直接从组织或细胞中提取总RNA，该试剂的成分为异硫氰酸胍、酚、8-羟基喹啉和β-巯基乙醇。在样品裂解或匀浆的过程中，trizol试剂能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出来的核酸酶且保持RNA的完整性。加入氯仿离心后，样品分为水相层和有机相层，RNA存在于水相层中，在酸性条件下总RNA保留在上层水相中。而大部分DNA和蛋白质保留在中间相或下层有机相中。收集上述水样层后，可通过异丙醇沉淀来回收RNA。此外，样品中的DNA和蛋白也能以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，而在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。

 主要试剂和耗材  

Trizol    氯仿   异丙醇   乙醇   离心管 RNase-Free水  枪头

 实验流程图  

TRIzol 无氯仿解决方案

  01 

加1mL TRIeasyTM（Cat#10606ES）试剂，裂解样本，室温孵育5 min；

02 

加0.2 mL RNA Extraction buffer（Cat#19203ES） ，振荡混匀，孵育3 min；

03 

在4°C下12000×g离心样本15 min；

04 

取约500 μL上清液至新样本管中；

05 

加等样本体积的异丙醇，颠倒混匀，在4°C下孵育10 min；

06 

在4°C下12000×g离心10 min，弃上清；

07 

加1mL 75%乙醇，重悬沉淀，短暂涡旋样本，在4°C下7500×g离心5 min，弃上清液。此步骤重复一次；

08 

干燥5-10 min，加20-50 μL RNase-Free水，在55°C的水浴孵育10min。

19203ES

RNA Extraction buffer RNA提取辅助试剂

 产品亮点  

毒性低：本产品与氯仿的功能非常相似，但不含氯仿，相对毒性低，是氯仿的完美替代品；
分离效果好：本产品替代氯仿提取RNA，具有与氯仿媲美的分离效果；
使用方便、性价比高：每个样本添加200 μL，使用量与氯仿完全一致。

 产品性能  

采用TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent 10606ES提取10 mg鱼肝样本，实验组加入0.2 mL RNA Extraction buffer（Cat#19203ES），对照组加入0.2 mL氯仿，提取的RNA采用Nanodrop检测RNA的浓度和纯度，取5 μL进行琼脂糖凝胶电泳。结果如图所示，翌圣无氯仿提取后的RNA，含量高，纯度好，完整性指数高。

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