ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。
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操作步骤 |
可能原因 |
解决办法 |
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选择试剂 |
选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。 | |
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加样 |
1.血清或血浆标本分离不好即进行加样； |
1.标本为血清：最好将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。 |
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孵育 |
1.孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底； |
1.贴封片或加盖； |
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洗板 |
1.采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。 |
1.保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干； |
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显色 |
1. 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂； |
1. 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； |
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终止 |
加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。 |
加终止液时应避免产生气泡。 |
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读板 |
读板时板底不清洁。 |
应保证酶标板清洁。 |
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全过程 |
1.整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; | |
在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。