摘要:当前国内对猪瘟抗体水平检测方法有ELISA检测法和猪瘟正向间接血凝法，以及免疫金标试纸检测法。前两种方法虽然都具有微量、特异、准确的优点，但需要比较完备的实验仪器和经验丰富的技术人员，且检测时间较长。而金标试纸条是新开发的一种全新猪瘟抗体检测方法，检测一个样品只需8～15 min，操作简便、快速、直观、结果容易判定，但其应用检测结果的准确性尚待我们求证。鉴于这种情况，我们开展了免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验两种检测方法，并进行了比较研究【1】。

关键词:猪瘟; 免疫金标试纸检测；正向间接血凝试验
前言:
猪瘟一直以来是威胁我县养猪业的头号疾病,对于猪瘟的控制目前主要还是依靠猪瘟疫苗的免疫预防,猪瘟疫苗免疫效果的好坏直接关系到全县猪瘟防疫的效果以及生猪感染压力的大小,也关系到我县畜牧养殖业的可持续健康发展【2】。猪场及农村散养户定期对猪瘟疫苗效果检测评估是十分必要的。目前,用于猪瘟疫苗免疫效果评估的方法很多,如何选择一种切合我县实际的检测方法是科学评估的首要问题。我们采用两种常用的评估方法(免疫金标试纸检测和正向间接血凝试验)对全县农村散养户的336份血清样品进行了猪瘟免疫效果平行对比检测试验【3】，这对于以后我县动物疫病预防控制中心能够及时准确掌握生猪猪瘟免疫效果，具有非常深远的指导意义。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1 被检样品采自全县12个乡镇农村散养户不同日龄的猪，其中仔猪(20～45日龄)96份, 生产母猪102份,肥猪(70～160日龄)138份。散养户提供的336份血清均为猪瘟免疫首免20日龄左右,二免在65日龄免疫后18～20天所采的仔猪全血样品。
1.1.2 猪瘟正向间接血凝试剂盒(包括猪瘟正向间接血凝抗原、猪瘟稀释液、猪瘟阴、阳性血清)购自中国农业科学院兰州兽医研究所,试剂盒批号:20080812 。
1.1.3 96孔血凝板(110。V型)，飞鸽牌台式离心机，精密移液器(5～50μl、20～200μl)，微量振荡器。
1.1.4 猪瘟抗体免疫金标试纸条，购自深圳市康百得生物科技有限公司，生产批号：20081020。
1.2 方法
将336份全血样品放入离心机离心，5分钟后吸取上层血清液，置于试管架上备用。在金标检测卡的椭圆形加样孔内加入2～3滴(50～100μ1)待检猪血清。将检测卡平放在平面上，在室温下静置8～15min判定结果。加样后8～15min可与金标试纸附带的参照卡的色带滴度进行参考比较，当被检样品检测线（T）条带的色泽大于参照卡中猪瘟抗体效价为1∶16 时，说明检测样品中猪瘟抗体的滴度较高，如果低于1∶16 则表示被检猪的猪瘟抗体水平过低，应及时进行猪瘟疫苗接种。正向间接血凝试验操作顺序如下:加稀释液→加被检血清→在血凝板上倍比稀释被检血清、阳性血清→加血凝抗原→震荡摇匀→37℃下静置1～2h→结果判定。以50%红血球出现凝集的血清最大稀释倍数为该血清的血凝效价。血凝效价达1∶16为免疫合格,1∶16 以下为免疫不合格【4】。

2 结果与分析