PERCIVAL AR系列培养箱在拟南芥培养中的应用-分析方法-资讯-生物在线

PERCIVAL AR系列培养箱在拟南芥培养中的应用

作者:北京五洲东方科技发展有限公司 2011-11-24T00:00 (访问量:5886)

  拟南芥又名阿拉伯芥,属十字花科,为二年生草本植物。具有植株形态小,平铺直径5cm,高30cm;生长区域小,易于培养;基因组小,只有5条染色体,15700万个碱基对,27000个基因;生长速度快,周期短,一个世代大约只需要6周的时间;可自花授粉,也可以在不同种质系间杂交,种子多,每株每世代可产数千粒种子等特点。因此,拟南芥是植物科学,包括遗传学和植物发育研究中的模式植物之一(图1)。在2000年,拟南芥成为了第一个基因组被完整测序的植物。


图1


  尽管拟南芥生长周期短,且易于培养,但根据不同的实验需求,在培养过程中,对光照、水分及湿度等各种条件的控制有所差别,利用PERCIVAL AR系列拟南芥培养箱可设置不同的生长环境,满足不同的实验需求。                               
  一、正常培养
  简单的拟南芥培养,可用于基因表达、器官发育、基因突变等研究。
  1、首先把拟南芥种子放到滤纸上,用70%酒精进行消毒处理,再用无水酒精进行处理(也可选择20%漂白剂以及0.05% Triton X-100 非离子表面活性剂做杀菌处理20分钟)。用无菌水冲洗5遍,然后将种子点到MS培养基上,pH5.9,另加0.9%琼脂以及2%蔗糖。
  2、把种子放到4℃黑暗条件下进行春化48h-72h左右,在长日照或短日照条件下催芽,然后转到PERCIVAL AR系列培养箱中(图2)。利用Intellus控制器,编辑简单的昼夜模式,设定光照时间16小时(黑暗8小时)或者光照14小时(黑暗10小时);选配Q23+连续光强调节装置,设定光照强度为100-150umol/m2.s;设定箱体内温度为光照条件下20-22℃,黑暗条件下18-20℃;选配湿度控制系统,设定箱体内相对湿度70%。


图2


  3、出苗大约7~10天,然后移入土中培养,采用底部灌溉方式浇水(利用土壤的毛细作用)。在第一次浇水前,可使土壤完全干燥,以后每隔7~10天浇一次水。
  4、土壤可用营养土、蛭石以及珍珠岩比例10:1:1的比例配置,也可直接用堆肥、蛭石以及草炭等进行混合。在生长过程中,可用普通的花肥施肥一次或者不施肥。
  5、当植株长到一定高度时,可剪断茎杆,以产生更多的花序,可用于转化研究或者获得更多的种子(图3)。


图3


  二、特殊培养
  为了加快拟南芥生长速度,在移入土壤培养后,可设定长日照,利用Intellus控制器,编辑程序设定24h光照,光强100-250umol/m2.s,温度持续22-23℃。
  拟南芥根系处理培养,可减少光照时间为8-12h,提高光照强度为100-350umol/m2.s,温度为光照条件下22-23℃,黑暗条件下18-20℃,其余培养条件同正常培养。
  参考文献
  1、David M.Brown, Leo A.H.Zeef, Joanne Ellis, et al. Identification of Novel Genes in Arabidopsis Involved in Secondary Cell Wall Formation Using Expression Profiling and Reverse Genetics. The Plant Cell 2005,17,2281-2295
  2、John C.Sedbrook, David W.Ehrhardt, Sarah E.Fisher, et al. The Arabidopsis SKU6/SPIRAL1 Gene Encodes a Plus End-Localized Microtubule-Interacting Protein Involved in Directional Cell Expansion. The Plant Cell 2004,16,1506-1520
  3、Nobuhiro Suzuki, Ludmila Rizhsky, Hongjian Liang, et al. Enhanced Tolerance to Environmental   Stress in Transgenic Plants Expressing the Transcriptional Coactivator Multiprotein Bridging Factor 1c. Plant Physiology 2005,139, 1313-1322
  4、Sholpan Davletova, Ludmila Rizhsky, Hongjian liang, et al. Cytosolic Ascorbate Peroxidase 1 Is a Central Component of the Reactive Oxygen Gene Network of Arabidopsis. The Plant Cell 2005,17,268-281
  5、Stephen Tottey, Maryse A.Block, Michael Allen, et al. Arabidopsis Chl27, Located in both envelope and thylakoid membranes, is required for the synthesis of protochlorophyllide. PNAS 2003,100,16119-16124

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