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TTx DNA聚合酶源于Tth DNA聚合酶,而逆转录活性较Tth DNA聚合酶大幅提高,在优化的反应Buffer中,TTx表现出卓越的RT-PCR特性,但TTx DNA Polymerase的活性仍然依赖于对PCR有抑制活性的Mn2+,这种专用的反应Buffer系统限制了TTx应用的拓展性。mTTx DNA/RNA聚合酶经电子重构架技术,改变了TTx的活性配体中心,使其在Mg2+条件下仍然具有极强的逆转录活性。mTTx DNA/RNA Polymerase在Mg2+条件下对于DNA模板和RNA模板扩增能力几乎无偏差,这种独有的特性使得mTTx不再受限于反应Buffer系统,增加了其应用的拓展性,使得多种类型的实验得以实现,包括:采用单酶进行TaqMan RT-PCR、在单管相同的Buffer系统中对RNA和DNA进行多重检测、超多重的RNA模板扩增、RNA的NGS建库、高保真RT-PCR扩增等。 | ||||||||||||||||||||
主要特征 |
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单位定义 |
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一个活力单位即在在68°C条件下,30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。 | ||||||||||||||||||||
储存 |
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-20℃可保存3年,避免反复冻融。 | ||||||||||||||||||||
使用方法(以mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix为例) |
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1. 按以下组分配制RT-qPCR反应液 2×mTTx MasterMix 10 μl 上游引物(10 μM) 0.4 μl 下游引物(10 μM) 0.4 μl 荧光探针(10 μM) 0.2 μl RNA X μl ddH2O Up to 20 μl 注意:引物和探针的使用浓度可在0.1-0.8ul直接调整。 2. Direct One-Step RT-PCR程序 92℃ 5 min (热启动) 60℃ 5 min (逆转录) 92℃ 10 s 60℃ 30 s(收集信号) 循环35-45次 注意:mTTx的最佳变性温度为92℃,其它温度条件都会导致试剂性能下降。逆转录步骤的温度可根据实际情况在58-70℃调整。 |
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实例展示 |
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1. 以2019新冠病毒N基因体外转录RNA直接作为模板,应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix对不同拷贝的目标RNA进行TaqMan qPCR扩增,结果表明不同拷贝数的RNA,扩增性能良好。 | ||||||||||||||||||||
2. 应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix对不同拷贝的目标DNA和RNA进行TaqMan qPCR扩增,结果表明该产品对DNA模板和RNA模板扩增几乎无偏差,RNA模板比DNA模板更容易检出。 | ||||||||||||||||||||
3.将不同数量的Jurkat细胞直接加入到TaqMan PCR反应体系中,应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix进行内参基因GAPDH的TaqMan qPCR扩增。 | ||||||||||||||||||||
HotStart mTTx DNA/RNA Polymerase说明书
作者:上海信裕生物科技有限公司 2021-05-18T00:00 (访问量:898)
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