人甲型流感病毒抗原(FluA-Ag)ELISA试剂盒的实验原理-分析方法-资讯-生物在线

人甲型流感病毒抗原(FluA-Ag)ELISA试剂盒的实验原理

作者:上海远慕生物科技有限公司 2016-07-11T00:00 (访问量:3823)

    人甲型流感病毒抗原(FluA-Ag)elisa试剂盒实验原理:

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人甲型流感病毒抗原(FluA-Ag)表达。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中甲型流感病毒抗原(FluA-Ag)相结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中人甲型流感病毒抗原(FluA-Ag)的存在与否。

    人甲型流感病毒抗原(FluA-Ag)ELISA试剂盒操作步骤:

    1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

    2.加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50µl。然后在待测样品孔先

    加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

    3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

    4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

    5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

    6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。

    7.温育:操作同3。

    8.洗涤:操作同5。

    9.显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

    10.终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

    11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

    人甲型流感病毒抗原(FluA-Ag)ELISA试剂盒计算和结果判定:

    试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10临界值(CUTOFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定:样品OD值<临界值(CUTOFF)者为人甲型流感病毒抗原(FluA-Ag)阴性阳性判定:样品OD值≥临界值(CUTOFF)者为人甲型流感病毒抗原(FluA-Ag)阳性。人甲型流感病毒抗原(FluA-Ag)ELISA试剂盒的实验原理 人ELISA试剂盒 远慕生物 ELISA检测试剂盒 

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