1.Amplite 荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比率测定法如何工作？该测定实际量化了什么？

答：Amplite 荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比率测定试剂盒*绿色荧光*（货号10056）包含仅与还原型谷胱甘肽（即GSH）反应而不与GSSG反应的探针。通过测量还原前的GSH浓度和还原后的总GSH浓度，用户可以计算GSSG浓度以及GSH / GSSG比率。有关特定的方程式和过程，请查阅我们的示例协议。

2.我的Amplite 荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比率分析试剂盒的GSH和总GSH校准曲线是否有问题？为什么我的标准曲线没有意义？

答：从理论上讲，谷胱甘肽和总谷胱甘肽的校准曲线应相当接近。要记住的重要一点是，连续稀释后[GSH]为5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.1563、0.0781和0 µM，而[TGSH]为10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125， 0.1563和0 µM。在相同的系列稀释后。这是因为GSSG / GSH摩尔比为：1 GSSG⟶ 2 GSH。因此，绘制标准曲线时，TGSH的x轴值需要是GSH的x轴值的两倍。

3.我可以将Triton X-100用作Amplite 荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比分析试剂盒*绿色荧光*（货号10056）的裂解缓冲液吗？我可以使用X缓冲液裂解/制备样品吗？

答：您可以使用Triton X-100，但是它可能会导致测定读数的背景增加。有关特定缓冲液的其他问题，请通过helen@aatbio.com与我们的技术支持联系。

4.在使用Amplite 荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比率分析试剂盒*绿色荧光*（货号10056）之前，我需要对样品进行脱蛋白处理吗？

答;如果发现不一致或意外的结果，则一种解决方案可能是在使用测定之前对样品进行脱蛋白处理。

5.为什么我的GSH浓度大于总GSH浓度？为什么我计算出的GSH / TGSH比值大于1？

答：这种结果有多种可能的原因。例如，[GSH]和[TGSH]之间可能没有统计学上的显着差异，表明样品中的GSSG很少甚至没有。在这种情况下，由于实验偏差，GSH浓度可能会大大高于GSH总浓度。另一种可能的解释是由于测定活性降低，可能导致测定结果不一致。该测定成分在室温下以及暴露于光线下均不稳定，应在制备后的两个小时内使用。对于具有更高稳定性的试剂盒，我们建议使用Amplite 快速荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比率检测试剂盒*绿色荧光*。

6.为什么总GSH标准溶液浓度等于GSSG标准溶液浓度的两倍？为什么[GSSG]等于（[总GSH]-[GSH]）除以2？

答：还原后，1摩尔GSSG变为2摩尔GSH。因此，如果初始GSSG浓度为1μM，则还原后的GSH浓度为2μM。相反，要从[总GSH]中确定[GSSG]，则必须除以2以说明GSSG与GSH的摩尔比：1 GSSG⟶ 2 GSH。

7.Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速检测试剂盒 绿色荧光（Cat＃10060）中提供的探针仅与还原的GSH反应，而与GSSG不反应。为什么还需要准备GSSG标准曲线？

答：在氧化应激期间，GSSG会在细胞中积累，从而增加GSSG与GSH的比例。由于Thiolite Green 520WS仅与GSH反应，因此必须首先将累积的GSSG酶转化为GSH。因此，要测量GSH和总GSH，必须创建GSH和GSSG标准曲线。减少的GSH使用GSH标准测量，总GSH（GSH和GSSG）使用GSSG标准测量。要计算GSSG，请从总GSH中减去GSH量，然后使用此值确定终的GSH / GSSG比。