人Filaria Ag酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于检测人血清,血浆及相关液体样本中Filaria Ag水平。
实验原理:
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中人Filaria Ag。用纯化的人Filaria 抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中Filaria Ag相结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的Filaria抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中人Filaria Ag的存在与否。
试剂盒组成:
试剂盒组成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
说明书 |
1份 |
1份 |
|
封板膜 |
2片(48) |
2片(96) |
|
密封袋 |
1个 |
1个 |
|
酶标包被板 |
1×48 |
1×96 |
2 |
阴性对照 |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2 |
阳性对照 |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2 |
酶标试剂 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
样品稀释液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
显色剂A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
显色剂B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
终止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2 |
浓缩洗涤液 |
(20ml×20倍)×1瓶 |
(20ml×30倍)×1瓶 |
2 |
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:
1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
3. 温育:用封板膜封板后置
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