伴刀豆球蛋白A磁珠是表面共价偶联了伴刀豆球蛋白 A（ConA）的超顺磁性聚合物微球，具有单分散和磁反应性强等特点。ConA磁珠在Ca²⁺和Mg²⁺存在的情况下，通过伴刀豆球蛋白 A与末端α-D-甘露糖基和α-D-葡萄糖基的亲和作用，快速高效地分离纯化多糖、糖蛋白和糖脂等生物分子，而且使用ConA磁珠分离或固定细胞非常便捷，并在后续清洗过程中最大程度减少细胞丢失，也可以用于收集和固定细胞核，也可以直接用于CUT & Run和CUT & Tag（ChIP-seq实验的革新性技术）等实验。

产品性质

储存条件

2~8℃保存，有效期2年。

使用说明

以捕获细胞和纯化糖蛋白为例，用于Cut-Tag具体操作见12598ES试剂盒。

1. 缓冲液配置

1）自备试剂

2）自备设备和耗材：磁性分离架，旋转混合仪，PCR管，微量移液器及吸头（RNase-free）。

3）将磁珠恢复至室温，且均匀重悬。

1. 样品准备（以哺乳动物细胞为例）

1）准备哺乳动物细胞(1.0×10⁴~1.0×10⁵个)，离心收集(4℃，600×g，3~5min)，小心吸弃上清；

​​​​​​​2）加入 140 μL 结合缓冲液 ，充分混匀重悬细胞，离心收集(4℃，600×g，3~5min)，小心吸弃上清；

​​​​​​​3）加入 90 μL 结合缓冲液，充分混匀重悬细胞。

【注】：贴壁较紧的细胞可使用胰蛋白酶等部分消化获得，对于动物组织、植物或真菌细胞可通过特殊处理获得分散的细胞或原生质体进行实验。

1. 磁珠准备

​​​​​​​1）吸取10 μL均匀重悬的 Con A磁珠，加入40 μL 磁珠结合液，吹吸混合，磁吸弃上清。

​​​​​​​2）加入10 μL 磁珠结合液，吹吸混合。

1. 细胞捕获

​​​​​​​1）将重悬在结合液中的ConA磁珠（步骤3）轻轻滴加在细胞悬液（步骤2）中，颠倒5次混匀后，置于旋转仪上混匀，室温孵育30 min 或者4 ℃过夜。

​​​​​​​2）离心管在磁力架上放置1 min，吸弃上清。

​​​​​​​3）取500ul清洗液加入磁珠中，用移液器轻柔吹打，重悬磁珠，再置于磁力架1 min，吸弃上清。

​​​​​​​4）重复步骤3）洗涤3-4次。

1. 洗脱

​​​​​​​1）糖蛋白的洗脱：加入50~250 μL洗脱液，置于翻转混合仪上室温孵育10~30 min，接着在磁力架上静置 1 min，收集上清得到糖蛋白，可用于SDS-PAGE电泳或Western检测

【注】：也可使用PNGase F酶切除糖基进行洗脱。

​​​​​​​​​​​​​​2）细胞的洗脱：磁珠粒径小，对细胞的生长和活性影响较小，也可以选择不洗脱。

注意事项​​​​​​​

1. 磁珠应避冷冻，否则可能会导致磁珠碎裂，性能下降。

2. 磁珠取用前应恢复至室温，且充分混匀；但不要剧烈震荡，否则容易产生气泡。

3. 建议样本细胞活性不低于80% (细胞活性可以用台盼蓝染色来鉴定)。

4. ConA在Ca²⁺和Mn²⁺离子存在时才有活性，实验中应用的溶液不能含有EDTA等螯合剂，否则会导致结合效率降低。

5. 水平旋转时定时轻弹底部混匀，细胞量较多时易聚集干结。

6. 枪头吸吹时要缓慢，避免产生过多气泡；避免用10 μL小枪头吹吸细胞；

7. 吸除管内液体时，枪头远离磁珠一端，避免枪头粘连带出磁珠。

8. 针对特定细胞类型和细胞量，可能需要增减磁珠用量以达到最优效果。

9. 本产品仅作科研用途！

10. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Ver.CN20230601