高保真DNA聚合酶 10135ES60
产品名称: 高保真DNA聚合酶 10135ES60
英文名称: Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase
产品编号: 10135ES60
产品价格: 0
产品产地: Yeasen
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2024-12-10T11:21:51
使用范围: null
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Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase
Hieff Canace® 高保真DNA聚合酶
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
储存 |
价格(元) |
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase |
10135ES10 |
10 U |
-20oC |
96.00 |
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase |
10135ES60 |
100 U |
-20oC |
626.00 |
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase |
10135ES76 |
500 U |
-20oC |
2356.00 |
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase |
10135ES80 |
1000 U |
-20oC |
4256.00 |
产品描述
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase,经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性,保真性。耐热温度达到98℃,保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了独特的延伸因子,扩增速度达到15 sec/kb。本产品配备了优化后的酶缓冲液,添加了PCR增强组分,使得该酶具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性,非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分
产品应用
基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃, 30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。
质量控制
核酸外切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA -HindIII,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA,37℃温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中,加入2 U本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。
运输与保存方法
冰袋运输。-20oC保存。
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
PCR反应体系(推荐冰上配制)
【注】: 1) 试剂使用:使用前要充分融化混匀。
2) 聚合酶浓度:推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化,请勿超过2 U/50 μL。
3) 聚合酶添加:为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物,建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
4)Mg2+终浓度:体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要,可用50 mM MgCl2,以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
5)高GC模板:在体系中加入终浓度为3 %的DMSO可能有利于扩增。
6) 不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系):
<, tr style="width: 10px; overflow: hidden; height: 16.95pt;">
基因组DNA |
50 ng-200 ng |
PCR扩增程序
【注】:1) 预变性温度和时间:推荐使用98℃。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30 sec;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min;高GC含量模板为5-10 min。
2) 退火温度和时间:推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3) 延伸温度和时间:推荐使用72℃。延伸时间推荐如下:质粒DNA等简单模板为15 sec/kb;cDNA、基因组DNA等复杂模板为30 sec/kb,根据实际情况可延长至40 sec/kb。
4) 扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端,产物直接用于克隆,请使用平末端连接载体。
应用实例
图1: Hieff Canace® 高保真DNA聚合酶扩增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可实现高特异性、高产量扩增。模板:拟南芥基因组DNA,50 ng/50 μL;退火温度:60℃;延伸时间:30 sec/kb。M:1 kb ladder;1:2.1 kb;2:3.1 kb;3:4.2 kb;4:5 kb;5:6 kb。
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