蛋白质糖基化位点及糖型鉴定
蛋白质糖基化位点鉴定最常用的是多级质谱法,蛋白质经Trypsin酶切消化成肽段后,再用PNGase F进行糖链的酶切,得到肽段和糖链两个部分。对于肽段,通过高分辨一级质谱可发现与肽段分子量理论值比较存在0.986Da的质量漂移,则可确定发生了糖基化,二级质谱同时可测定中性
双向电泳技术
双向电泳(Two-dimensional electrophoresis)的基本原理是利用蛋白质的等电点和分子量不同而分离蛋白质:第一向电泳——等电聚焦(IEF)根据蛋白质的等电点不同将蛋白质分离,第二向电泳——十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)利用蛋白质的分子量大小不同将
蛋白质定性分析
bottom-up分析策略:存在于溶液或者凝胶电泳条带中的蛋白质经过蛋白酶(如胰蛋白酶)酶解消化成较小肽段片段,再进入质量分析器,最后通过肽指纹图谱或者串联质谱法进行肽段鉴定。